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Clasificación y calificación embrionaria

Clasificación y calificación embrionaria

La clasificación y evaluación de los embriones son sin duda los procedimientos más difíciles para aquellos técnicos y profesionales que comienzan a trabajar con esta biotecnología reproductiva. En realidad no es algo muy complicado pero requiere habilidad y experiencia. A continuación expongo para los interesados los aspectos más relevantes de estos dos procedimientos.

Los embriones se buscan con un estereomicroscopio en magnificación 10-15X. Teniendo el medio en una caja de petri se pone una placa cuadriculada bajo esta para facilitar la búsqueda y clasificación. Luego de haber encontrado el último embrión se busca una o dos veces más para descartar que alguna futura cría se nos haya quedado en el medio.

Un oocito mide aproximadamente 150-190µm y tiene una zona pelúcida de aproximadamente 12-15µm. Este diámetro permanece sin variaciones considerables desde que tiene una célula hasta que se encuentra en fase de blastocisto expandido. El técnico puede contar las células del embrión sin dificultad hasta que este tiene 16 células, luego de esto, las células se dividen asincrónicamente e identificarlas se hace un poco difícil. Cuando las células comienzan a adherirse entre ellas y comienzan a perder su forma esférica el embrión recibe el nombre de mórula.

La zona pelúcida se observa como una estructura transparente que rodea a las células. Entre la zona pelúcida y las células existe un espacio llamado espacio perivitelino. Este espacio perivitelino es identificable hasta que el embrión se encuentra en estado de blastocisto.

1. Zona Pelúcida; 2. Masa Celular; 3. Espacio Perivitelino

En la imagen anterior vemos: 1. Zona pelúcida; 2. Masa celular; 3. Espacio perivitelino.

Los estados de desarrollo del embrión se identifican, después de tener 16 células, de acuerdo al desarrollo morfológico.

Mórula (Estadio 4): Las células (blastómeras) son difíciles de distinguir unas de otras. El embrión tiene aproximadamente 5 días.

Mórula compacta: Las blastómeras se juntan y forman una masa celular sólida. El embrión ocupa aproximadamente un 60% del espacio perivitelino.

En la imagen anterior vemos una mórula (Estado 4)

Blastocisto temprano (Estadio 5): Presenta una cavidad en donde se encuentra un fluido llamado blastocele. El embrión ocupa el 70-80% del espacio perivitelino. Se puede diferenciar el trofoblasto y el macizo celular interno. Luego de esta etapa viene el Blastocisto (Estadio 6) propiamente dicho. La única diferencia entre estos dos estados es básicamente el tamaño de la cavidad.

En la imagen anterior vemos un Blastocisto. Nótese la cavidad y el fluido (1).

Blastocisto expandido (Estadio7): El diámetro aumenta hasta en un 150%. La zona pelúcida se adelgaza hasta un 66% con respecto al grosor que tenía en el Estado 4. Estos embriones tienen una edad estimada de 8 a 9 días.

Nótese en esta imágen el adelgazamiento de la zona pelúcida

Blastocisto eclosionado (Estadio 8): La masa celular puede estar por fuera de la zona pelúcida o en proceso de salir. Luego viene un estado llamado Blastocisto eclosionado expandido (Estadio 9).

El grado de desarrollo de un embrió se determina por números en donde el número 1 identifica un oocito sin fertilizar, el número 2 nos identifica un embrión con hasta 16 células (2 a 5 días). El número 3 identifica una mórula temprana y los números del 4 al 9 nos identifican embriones que ya presentaron compactación. En un lavado convencional los embriones son colectados entre los días 6 y 8, o sea entre mórula y blastocisto.

En resúmen los estadios del embrión son los siguientes:

Estado 1: Infertilizado

Estado 2: de 2 a 16 células

Estado 3: Mórula temprana

Estado 4: Mórula

Estado 5: Blastocisto temprano

Estado 6: Blastocisto

Estado 7: Blastocisto expandido

Estado 8: Blastocisto eclosionado

Estado 9: Blastocisto eclosionado en expansión

En la imagen anterior vemos: 1. Mórula compacta; 2. Infertilizados; 3. Mórulas tempranas; 4. Infertilizado.

Nótese en la imagen anterior que en la mórula compacta no podemos diferenciar bien las células mientras que en las mórulas tempranas sí. Los infertilizados los identificamos porque su interior es un óvalo bien delimitidado y al observarlo detenidamente vemos que ése interior esta compuesto no por bordes (segmentos) sino por gránulos (estructura de puntillismo).

Hasta aquí hemos visto a grosso modo la clasificación de los embriones según su estado. Ahora veamos la calificación que le damos a los embriones de acuerdo a su calidad.

La evaluación la damos de acuerdo a sus características morfológicas. Estas características son subjetivas y pueden variar de un técnico a otro. Las características que debemos tener en cuenta para calificar un embrión son:

  1. Forma del embrión
  2. Color y textura de la masa celular
  3. Diferencia de tamaño entre las blastómeras
  4. Numero y nivel de compactación de las blastómeras
  5. Tamaño del espacio perivitelino
  6. Presencia de blastómeras sueltas o separadas
  7. Presencia o ausencia de vesículas
  8. Forma y estado de la zona pelúcida

Si en la clasificación utilizábamos una escala numérica del 1 al 9 en la calificación vamos a utilizar una escala numérica que va del 1 al 4:

Calidad 1: Embriones excelentes y buenos. Son embriones esféricos, simétricos con células de tamaño, color y texturas uniformes. Puede haber pequeñas imperfecciones como algunas blastómeras sueltas, tamaño irregular o algunas vesículas. Estos embriones son los ideales para congelar.

Calidad 2: Embriones regulares. Tienen problemas más definidos incluyendo blastómeras sueltas, vesículas o células degeneradas. Estos embriones pueden ser congelados pero se obtendrán resultados bajos. Sin embargo son embriones aceptables para ser transferidos en fresco (de donadora a receptora directamente sin congelación).

Calidad 3: Embriones malos. Numerosas blastómeras sueltas, células degeneradas. Células de distinto tamaño, color y textura, formas irregulares. Numerosas vesículas. No se deben congelar y al ser transferidos en fresco nos dan resultados pobres.

Calidad 4: Muertos o degenerados. Son embriones cuyas blastómeras se encuentran en desorden y sueltas. Hay muchas vesículas. Puede tener un aspecto granular como los infertilizados y tener un crecimiento retardado con respecto a los otros embriones de la colecta. No se congelan ni se transfieren en fresco.

En la imagen anterior vemos diferentes estructuras dentro de las cuales se identifican mórulas, blastocistos, infertilizados y degenerados. Que el estudiante determine cual es cual en la imagen.

Teniendo en cuenta lo visto en cuanto a clasificación y calificación en la práctica podemos encontrarnos, entre otros, con los siguientes embriones:

  • 4:1 mórula de excelente calidad. Transferible y congelable.
  • 4:2 mórula regular. Resultados bajos al congelar y resultados buenos al transferir en fresco.
  • 4:3 mórula mala. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
  • 4:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.
  • 5:1 blastocisto de excelente calidad. Transferible y congelable.
  • 5:2 blastocisto regular. Resultados bajos al congelar y buenos al transferir en fresco.
  • 5:3 blastocisto malo. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
  • 5:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.

También podemos encontrar embriones de otro tipo como 6:1 ó 7:3 pero el ejemplo aplica para todos. Feliz fin de semana, luego seguimos hablando del tema.

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Acerca de Jairo Serrano

Jairo Serrano es Médico Veterinario Zootecnista. Ha hecho estudios de posgrado en Inseminación Artificial (COLINSEMART, Bogotá), Transferencia de Embriones (CGR, Bogotá) y Ecografía (OVUSEM, México) entre otros. Actualmente cursa estudios de posgrado en Reproducción Bovina con la Universidad Nacional de Córdoba, Argentina y el IRAC. Presta sus servicios a diferentes empresas ganaderas de Santander, Norte de Santander y el Cesár así como también a algunas empresas ganaderas en Centroamérica. Es el director de Prosegan e Instructor de los cursos de reproducción que ofrece esta empresa. Para contactar a este profesional pueden escribir al correo electrónico prosegan@gmail.com o llamar al celular 311 263 8110.

3 Comentarios

  1. Soy Zootecnista M.Sc. en Biología y en el blog de inseminacion artificial le mende unos comentarios sobre algo que vi en Brasil y que quisiera me comentara. Se trata de que en un finca vi que hacian la inseminacion via vaginal cogiendo el cervix con la mano directamente, luego introducen la pistola y mueven el cervix para que pase la pistola y hacen el disparo. La diferencia con la convencional es que la mano no va por el recto sino por la vulva. Ellos dicen que hay menos maltrato y es mas facil ,porque en el celo lel cuello esta dilatado y reportan resultados superiores al 80%. Espero sus comentario que somn importantes

  2. Hola Fernando.

    En mi humilde opinión esas son variaciones innecesarias. ¿Para qué buscarle variaciones a una técnica tan sencilla y de buenos resultados como la inseminación rectovaginal? Ahora, no dudo que estas otras técnicas puedan producir buenos resultados pero te repito que seguirle buscando variaciones es totalmente innecesario ya que en mi experiencia te puedo contar de mil casos en donde los inseminadores no son ni veterinarios ni técnicos.

    ¿Qué es lo que ocurre? Primero la pereza de no aprender una técnica sencilla pero que se ha llenado de mitos y prohibiciones por los veterinarios que temen perder su trabajo si los demás aprenden a inseminar. Segundo es ese afan de innovar en cosas que no hay que innovar para nada. Alguien que haga un curso de I.A. aprende a inseminar en 5 días. Al principio se demorará 10 ó 15 minutos inseminando una vaca pero en poco tiempo lo hará en 5 y con experiencia lo hará en 2 minutos. Un curso de I.A. cuesta 200 dólares y los beneficios son incuantificables.

    Yo no dudo que esas técnicas funcionen pero ¿para qué? sería como cambiar la forma en que nos atamos los zapatos porque apareció una forma más rápida.

    Yo he leído en foros planteamientos como: ¿Será bueno descongelar a 40°C durante 20 segundos? Esas son cosas que honestamente dan risa: si estamos descongelando a 37°C durante 35-40 segundos ¿Para qué queremos ahorrarnos 15 segundos si de la segunda forma preñamos vacas? Hay cosas que ya están hechas y a no ser que se logre una nueva técnica donde se superen considerablemente los resultados yo no le veo razón de ser a cambiarlas.

  3. Estimado Dr. Muy buenas Buenos dias, son muy buenos sus articulos. y quisiera q me oriente en lo siguiente. Estoy equipando un pequeño laboratorio para superovulacion y transferencia de embriones en Bovinos y me consulta son los siguientes:
    Materiales utilizados son:
    - Cateteres Lampeter Flexible de 2 vias Punta metalica inoxidable(Sistema Circuito cerrado con flujo discontinuo (adaptado de Brand y Hoogekamp)y bienen de dos tipos como CH16 y CH18 ¿Cual es la diferencia segun su experiencia? o q otros cateteres de recoleccion usted me recomienda?
    - Mandriles: al Comprar los cateteres sin incluidas los mandriles o se comprar por separado?
    - Clamps ¿Que es o que otro nombre lleva? y en que parte de la tecnica se utiliza?

    De antemano quedo muy agradecido por su respuesta esperando su pronta respuesta me despido con las consideraciones mas distinguidas.

    Alberto

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